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【1001问】问题271:是否有一种标准阿新蓝（Alcian blue）法更简单效果更佳的方法？

2023-04-25

标准阿新蓝（Alcian blue）法是最常用的显示酸性黏液物质的方法，但此法很不易掌握，是否有一种最简单效果最佳的方法？

显示酸性黏液物质，特别是显示酸性弱硫酸化或酸性非硫酸化黏液物质，至今仍多用标准阿新蓝（Alcian blue）法。但此法并不完全理想，在染色过程中往往因中性红强染遮盖一部分阿新蓝的颜色，影响色差，色泽不够鲜艳。在这里介绍一种新的改良方法，即阿新蓝和中性红染料共同溶解在乙酸盐缓冲液（pH 2.7）中，配成混合液，使酸性黏液物质和细胞核在同一步骤中同时着色，证明效果良好。同标准阿新蓝（Alcian blue）法比较，本法简单，减少了两个步骤，染色稳定，容易掌握，阿新蓝着色力强。混合液可在室温下保存较长时间，染色性能不变。

阿新蓝所以能显示酸性黏液物质，是因为阿新蓝是一阳离子（阳性电荷）染料，同酸性黏液物质中的聚阴离子（Polyanlons）-硫酸基和羧基以静电形式结合。因此，染液的pH的变化对染色的强弱和可靠性有重要的影响。如果阿新蓝在能使被反应基完全解离的pH下作用，染色将会增强。本法是乙酸盐缓冲溶液作为阿新蓝和中性红的溶解剂，使混合液的pH保持在2.5到2.7之间，这不但使阿新蓝和中性红保持原有的染色特性（即阿新蓝染酸性黏液物质，中性红染细胞核），而且使染色稳定，避免了中性红遮盖阿新蓝的现象，也未见到阿新蓝干扰中性红的着色，对比十分清晰。

1.试剂制备：

阿新蓝-中性红混合液（pH 2.6）的配制：阿新蓝8G×1g+中性红1g溶解在100ml乙酸盐缓冲溶液（pH 2.7）中过滤后即可染色。

2.染色步骤：

（1）切片按常规递次入水。

（2）阿新蓝-中性红混合液染3～10分钟。

（3）自来水洗。

（4）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封同。

3.结果判定：

酸性黏液物质蓝绿色，细胞核红色。

4.注意事项：

（1）乙酸盐缓冲溶液（pH 2.7）的配法：量3%乙酸47ml+M/s乙酸钠3ml，混合即成。

（2）用1%阿新蓝醋酸（30A）溶液和1%中性红，按1︰1的比例混合，可代替本法的阿新蓝-中性红混合液。